流式細胞術(shù)是一種定量分析技術(shù)，是指利用
BD_FACSCalibur流式細胞儀檢測細胞特異性標記熒光信號而測定細胞的多種生物物理性質(zhì)的方法，同時也是一項可以把具有某相同熒光信號特性的某些細胞亞群從多細胞群體中分離和富集出來的細胞分析技術(shù)。
流式細胞儀的應(yīng)用
1、DNA倍體分析
DNA分析是流式細胞儀初且是現(xiàn)在應(yīng)用zui廣檢測項目。由于惡性細胞DNA含量通常與正常細胞不同，存在異倍體細胞，所以現(xiàn)有很研究評價異倍體細胞與腫瘤惡性度及其預后的關(guān)系。DNA含量檢測還可提供細胞周期方面的信息，這在細胞生物學中運用很廣泛。特別地，它可表示出細胞毒性藥物對細胞作用過程。這些DNA檢測還可與細胞表面標志物標記同時進行，這樣在細胞混合培養(yǎng)中，可通常追蹤表達特異標志物的細胞顯示其生長周期情況。所有方法都是基于染料能與核酸起特異的化學反應(yīng)并發(fā)射出熒光，常用的染料為PI，DAPI。
2、細胞生存能力實驗
使用Heochest 33342染料與DNA特異性結(jié)合，后因細胞活力不同染料的結(jié)合程度也各異，故可評估細胞的活性度。
3、計數(shù)外周血中檢測網(wǎng)織紅細胞
使用TO染料能夠特異性地與RNA結(jié)合，結(jié)合系數(shù)高達3000，故具有很好的性價比。
4、外周血、骨髓采集物中CD34陽性干細胞計數(shù)，臨床上用于骨髓移植前干細胞數(shù)理的測定。使用標準ISHAG方案，需要DNA或其他核染料占用FITC通道，PE標記CD34抗體，PE-CY5標記CD45抗體。
5、交叉淋巴細胞、粒細胞毒實驗
檢測識別供體血清中免疫球蛋白與受體粒細胞之間是否存在反應(yīng)有著重要臨床意義，因為這種反應(yīng)會導致移植后發(fā)熱、移植后肺損傷及免疫性粒細胞缺乏癥。流式細胞儀可檢測全血樣本與血清孵育后粒細胞上結(jié)合的人免疫球蛋白。FITC標記人免疫球蛋白抗體、PE標記粒細胞表面標志物、PE-CY5標記HLA抗體。
6、血小板自身抗體檢測
BD_FACSCalibur流式細胞儀血小板自身抗體識別人血小板抗原，會引起各種臨床相關(guān)癥狀，如新生兒自免性血小板減少癥、輸血后紫癜、難治性血小板減少。流式細胞可快速準確地檢測血小板自身抗體。FITC標記抗人免疫球蛋白抗體、PE標記識別血小板抗體。
7、移植交叉配型
原細胞毒實驗，主要用于避免移植物超急性排拆反應(yīng)。流式細胞儀用于監(jiān)測T或B細胞是否受到受體血清中免疫球蛋白攻擊，作為HLA配型前的預實驗。流式細胞儀因其高精確性已成為該領(lǐng)域內(nèi)的金標準。FITC標記抗人免疫球蛋白抗體、PE標記識別T細胞CD3或B細胞CD29抗體。
8、檢測細胞經(jīng)抗原或細胞有絲分裂刺激后活化效應(yīng)淋巴細胞早期活化指標CD69可用來檢測免疫治療效果。流式細胞使用三色分析可監(jiān)測淋巴細胞各亞群活化情況：FITC標記的CD3抗體、PE標記的CD8抗體、PE-CY5標記的CD69抗體。
9、細胞增殖狀態(tài)檢測
核增殖抗PCNA、Ki67、BrdUrd用于衡量細胞增殖分裂狀況，在評估腫瘤預后有重要意義。為些標志物的檢測一般同細胞表面標志物同時檢測。FITC標記PCNA或Ki67或BrdUrd，PE或(并)PE-CY5標記細胞表面標志物。
10、染色體分析
BD_FACSCalibur流式細胞儀染色分析運用兩種特異性染料：Hoechest33258與核苷酸AT結(jié)合;Chromomycin A3與GC相結(jié)合。從而在雙參數(shù)坐標上根據(jù)染色體ATCG含量的不同識別各種染色體。平時進行的染色體分析耗時且需要操作者ji具經(jīng)驗，而用流式細胞儀時可快速地識別出異常染色體，如加配分選系統(tǒng)可將這些異常染色體分選出來作進一步分析。
